如何判斷樣本是否反復(fù)凍融降解
判斷Anti-ACA11檢測(cè)樣本是否因反復(fù)凍融降解，可通過(guò)「外觀(guān)觀(guān)察→內(nèi)參驗(yàn)證→陽(yáng)性對(duì)照比對(duì)」三步快速確認(rèn)：?
第一步：先做直觀(guān)外觀(guān)初步判斷
凍融后如果蛋白溶液出現(xiàn)?渾濁、沉淀或絮狀物?，說(shuō)明已經(jīng)發(fā)生蛋白變性降解，肯定不能再用；
如果反復(fù)凍融后依然澄清透明，初步排除明顯降解，但仍需要后續(xù)驗(yàn)證。
第二步：通過(guò)內(nèi)參WB驗(yàn)證（最準(zhǔn)確的方法）
取該凍融樣本和新鮮提取的同來(lái)源樣本，同時(shí)跑WB檢測(cè)?管家基因內(nèi)參?（擬南芥常用Actin/UBQ，分子量約40kDa）；
判斷標(biāo)準(zhǔn)：
若凍融樣本的內(nèi)參條帶明顯比新鮮樣本暗，甚至無(wú)條帶，或條帶彌散模糊，說(shuō)明樣本已經(jīng)發(fā)生降解；
若兩個(gè)樣本的內(nèi)參條帶亮度、清晰度一致，說(shuō)明蛋白沒(méi)有明顯降解。
第三步：結(jié)合ACA11檢測(cè)結(jié)果輔助確認(rèn)
如果內(nèi)參正常，但ACA11條帶消失/亮度比新鮮樣本下降超過(guò)50%，也提示ACA11（低豐度膜蛋白，更易降解）已經(jīng)發(fā)生降解，這種情況內(nèi)參因?yàn)楦哓S度還能出帶，但靶標(biāo)已經(jīng)降解。
快速總結(jié)判斷邏輯
外觀(guān)渾濁有沉淀→直接判定降解；外觀(guān)澄清則做內(nèi)參驗(yàn)證，內(nèi)參條帶明顯變暗/彌散→判定降解；內(nèi)外都正常→無(wú)明顯降解，可以正常使用。
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